题目

我们用超滤法提取多糖,多糖分子量是63000和263000,对应的超滤孔径应该是多少?

提问时间：2021-01-23

答案

1、一种玉米浸泡水中提取、提纯脂多糖的方法,其特征是本方法通过分别采用超滤法、等电点法、三氯乙酸法三种方法分离玉米浸泡水中的蛋白质,再用纳滤膜将浸泡水浓缩,并通过乙醇沉淀法进一步分离浸泡水中的蛋白质,最后,用活性炭将脂多糖从浸泡水中提取出来：(1)等电点法分离蛋白及普通多糖：用饱和氢氧化钠溶液调节浸泡水中的PH值到7.3,将浸泡液通过分离机分离,在每分钟3000转转速下离心25分钟,分离沉淀上清液；(2)超滤法分离蛋白及普通多糖：选用截留分子量10万的超滤膜,对上述上清液进行超滤,取过滤液；(3)三氯乙酸法分离蛋白及普通多糖：在上述滤液中加入占其体积0.5％的三氯乙酸,搅拌30分钟,于每分钟3000转条件下离心25分钟,分离出含蛋白及普通多糖的上清液；(4)浓缩：采用纳米过滤装置,将分离蛋白及普通多糖后的浸泡水浓缩6-10倍,经纳滤膜过滤,取浓缩后的浸泡水；(5)再分离：在上述浓缩浸泡水中加入浓度为95％的乙醇,使浸泡水中乙醇浓度达到30％,搅拌5分钟,于每分钟2600转下离心30分钟,分离后取上清液；(6)提取：将上述上清液PH值调整为6.50,加入占其重量1.5-2.5％的经处理的活性炭,搅拌15分钟,静置10分钟,最后过滤,分离取出吸附了脂多糖活性炭；(7)提纯：将吸附了脂多糖的活性炭装填于1.6×90厘米的色谱柱中,用10毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷-盐酸/10毫摩尔每升氯化钠进行洗脱,洗脱液流速为每小时8毫升,分步收集洗脱液,每管收集4毫升,共收集52管,将第27～36管洗脱液合并,冷冻干燥；将DEAE-葡聚糖凝胶A-50装填于1.6×40厘米的色谱柱中.取上述干燥产物0.25克,溶于6毫升的10毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷-盐酸/10毫摩尔每升氯化钠中,将其加入色谱柱.用浓度依次增加的三羟甲基氨基甲烷-盐酸/氯化钠溶液进行洗脱,同时进行分步收集.每管收集6毫升,共收集60根管,洗脱剂流速为每小时8毫升；(8)脱盐：将第34～52根管的洗脱液合并,用葡聚糖凝胶G-15层析柱进行脱盐,以超纯水洗脱,最后冻干得到脂多糖成品.