题目

高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么

提问时间：2021-01-02

答案

sunmaocheng(站内联系TA)是不是在跑液相开始的时候,用磷酸钾缓冲液和纯乙腈先梯度洗脱?huanghaiyu(站内联系TA)只要盐完全溶解,一般不会有问题的,如果你确实很担心,就把乙腈和盐按照你的比例混合好,然后装在一个瓶子了,再进样品,这样就没问题了,使用完清洗的时候首先要用95%的水冲洗,避免残留.痴客(站内联系TA)以前用PB缓冲液和乙腈跑过,貌似没出过什么问题,但是后来老师说盐可能会堵柱子fisherme(站内联系TA)遇到过这样的问题,前一天有人用眼做流动相跑了,系统可能没有冲干净,隔天再用乙腈系统压力就会升高,甚至堵住.这明显是少量盐溶液在系统内有过量的乙腈会洗出盐结晶.x0d其实只要盐溶液和乙腈比例合适就不会存在析出的问题,关键是使用过后的后处理,也不能直接用100%水来冲,要有个缓冲.算不上经验,交流一下.lihuan0525(站内联系TA)最关键的就是使用后的及时冲洗.chene(站内联系TA)主要是要在用完后,耐心把柱子冲赶紧,这很重要,要不下次别人没法用的同时也耽搁你自己的使用!caozhanglei(站内联系TA)1.用前要用磷酸调PH值,使其达到所要求的PH值.x0d2.要现用现配,以免时间长缓冲盐析出和滋生细菌.x0d3.要一次配足,多次配的前后缓冲效果不一样,影响分离效果.x0d4.磷酸盐流动相尽量现用现配,不要存放太久,如果晶体析出,会严重损坏柱子和泵内的密封垫圈,还有柱塞杆.x0d5.流动相溶剂应选择hplc的溶剂或依此为标准的溶剂.流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气,清除微粒和灰尘.在送液泵内,为了防止杂物（固体）进入流路,装有吸滤器,但网孔径为10μm,比此更小的颗粒仍然可通过,这会导致流路和柱子堵塞和污染.为此,建议常用0.45μm滤膜过滤.流动相溶剂须经脱气,如不脱气,在溶剂混合时,或压力温度变化时容易产生大量气泡,会导致泵误动作和输液不畅,检测器产生噪声信号等.x0d6.流动相恢复到室温后使用.流动相温度与室温相差时,流动相在恢复到室温前,基线水平很难稳定,特别是发生漂移,也容易产生气泡等现象.水与有机溶剂混合时,混合液变化大,往往会与室温相差很大,务必注意.gdmc041(站内联系TA)安装保护住,再则冲洗好柱子,一般没有什么大碍了.痴夷子皮(站内联系TA)缓冲盐会析出是因为流动相中有机相（甲醇或乙腈）比例高所致.防止盐析出就需避免高比例有机相-缓冲盐体系的出现.x0d正规操作1、以流动相平衡色谱柱前,先用50%~90%以上的水平衡约30min,再更换上流动相.x0d2、使用后,及时以梯度冲洗色谱柱.80%~90%水 0.5ml/min冲约1h,再改用80%~90%有机相冲约1h,然后以纯乙腈冲及保存.