题目

PCR长的目的片段需要注意什么
我设计的引物溶解温度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的时间退火温度56度P出来几百bp的片段,然后又延长退火时间到4分钟改退火温度为53度再P,结果什么也没P出来.怎么办?我在网上查了一下有说要用高保真酶LA Taq和invitrogen的Taq,我同学说我的第一步94度的时间4分钟太长了（不是30循环里的第一步）请问我应该选择什么试剂和什么反应条件才能P出我的目的片段?

提问时间：2020-12-05

答案

扩不出来应该是你的退火温度的问题.用不用高保真酶的区别就在于会不会在延长的时候出错.
你可以做一个梯度PCR,如果还是没有扩出来的,那就是你的药品问题了,buffer啊,dNTP啊,酶啊有问题、