题目

产淀粉酶菌种的紫外诱变及平板的初筛
我要实验全过程

提问时间：2020-11-02

答案

紫外线诱变选育α-淀粉酶高产菌株
一、实验目的
1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术.
2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株.
二、实验原理
紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型.紫外线诱变一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20~30 cm,照射时间依菌种而异,一般为1~3 min,死亡率控制在50％~80％为宜.被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现.同时,对于细菌细胞的生理状态,要求培养至对数生长期为最好.
本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株.
三、实验材料
⑴ 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌
⑵ 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球
⑶ 培养基和试剂
① 无菌水、75%酒精
② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL.先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可.
③ 选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.7.0,121℃灭菌20min.
④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.7.4,121℃灭菌20min.
四、实验步骤
⑴ 菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20 mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37℃振荡培养12h,即为对数生长期的菌种.
⑵ 菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000r/min离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液.加入无菌水9mL,振荡均匀.
⑶ 诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个磁力搅拌棒）,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下（距离30cm）照射0.1min.
⑷ 取0.0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀.置37 ℃暗箱培养48h.
⑸ 在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径（C）和菌落直径（H）,挑选C/H值最大者接入斜面保藏.
五、注意事项
1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤.故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内.
2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用.臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率.臭氧在空气中的含量不能超过0.1％~1％.