题目

GST pull down实验结果怎么看啊

提问时间：2020-10-30

答案

这张图的主要目的是为了证明GST-Atrogin-1-wt（野生型）和β-catenin在体外的相互作用,
上图是考马斯亮蓝染色的图,看划线的解说,说明实验中是用GST bead与纯化的GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt共同孵育,用孵育后的bead来拉裂解液中的β-catenin
下图免疫印迹的,也就是western blot的结果,将上图同样的胶转膜之后,用是FLAG抗体免疫印迹的结果,其中实验组FLAG-β-catenin存在,而对照组GST并没有拉下β-catenin,所以相互作用是存在的.
最左栏的input是取自FLAG-β-catenin的细胞裂解液的样品,可作为阳性对照,下面的WB的结果说明了裂解液中存在FLAG-β-catenin.正常情况下,实验中控制input的总蛋白量与GST或者GST-Atrogin-1-wt是一样多的,这样可以表明裂解液中有多少FLAG-β-catenin被GST-Atrogin-1-wt拉下来.
GST相当于阴性对照,拉下目的蛋白的量是0%
input相当于阳性对照,含有目的蛋白100%
实验组就是GST-Atrogin-1-wt,在严格控制反应蛋白的量时,可以看出其作用强弱