题目

基因工程构建基因表达载体的问题
构建载体时,假如某质粒有一酶切点（在一特定启动了和终止子之间）,有一青霉素抗性基因（在一特定启动子和终止子外）,有一四环素抗性基因（在一特定启动子和终止子间）.构建载体后,如何用青霉素培养基和四环素培养基检测其为载体－载体连接物,目的基因－目的基因连接物,还是目的基因－载体连接物?
貌似是将受体细胞放入青霉素培养基，选出载体－载体连接物和目的基因－载体连接物，放人四环素培养基能存活的是载体－载体连接物。这是为什么？
请用我能理解的方式解释！

提问时间：2020-08-01

答案

我估计这个构建是利用你提到的酶切位点在你所说的“特定启动子”和“终止子”之间插入目的基因,这样一来,如果构建成功,就会破坏了原来位于该“特定启动子”和“终止子”之间的四环素抗性基因,即“目的基因－载体连接物”不具有四环素抗性.又因为青霉素抗性基因在该特定启动子和终止子之外,无论构建是否成功,都不会影响青霉素的抗性.综上,“目的基因－载体连接物”的受体细胞具有青霉素抗性但不具有四环素抗性.因此,可以首先利用青霉素抗性筛选出全部连接产物（在青霉素抗性培养基上可以存活）,然后再利用四环素抗性进行筛选剔除“载体－载体连接物”（这种连接没有破坏原有的四环素抗性）.也就是说所有既抗青霉素又抗四环素的都丢掉,只留下只抗青霉素不抗四环素的克隆.不知道这样说你明白了吗?