百科
蛋白质的提取和分离
水溶液提取法
稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。
下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。
1、pH值
蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。
2、盐浓度
稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔。升浓度为宜。缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。
相关试题
以下关于蛋白质工程的说法正确的是 [ ] A.蛋白质工程以基因工程为基础
B.蛋白质工程就是酶工程的延伸
C.蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造
D.蛋白质工程只能生产天然的蛋白质蛋白质工程的基本流程是
①蛋白质分子结构设计 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列[ ] A.①②③④
B.④②①③
C.③①④②
D.③④①②蛋白质工程是利用基因工程的方法对蛋白质进行改造,下列各项措施中,不正确的是 [ ] A.根据氨基酸的性质和特点,设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质
B.在蛋白质分子中替代某一个肽段或一个特定的结构区域
C.通过基因工程中定点诱变技术,有目的地改造蛋白质分子中某些活性部位的一个或几个氨基酸,以改善蛋白质的性质和功能
D.利用化学合成的方法对蛋白质分子的某一氨基酸进行修饰,以改善蛋白质性质和功能科学家为提高玉米赖氨酸含量,计划将天冬氨酸激酶的352位的苏氨酸变成异亮氨酸,将二氢吡啶二羧酸合成酶中104位的天冬氨酸变成异亮氨酸,就可以使玉米叶片和种子中的游离赖氨酸含量分别提高5倍和2倍,下列对玉米性状改变最可行的方法是 [ ] A.直接改造蚕白质的空间结构,从而控制生物的性状
B.直接对相应的基因进行改造,通过控制酶的合成,从而控制生物的性状
C.直接通过对酶的合成的控制,从而控制生物的性状
D.直接改造相应的mRNA,从而控制生物的性状关于蛋白质工程的说法错误的是 [ ]
A.蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构,使之更加符合人类需要
B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作,定向改变分子的结构
C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子
D.蛋白质工程与基因工程密不可分,又被称为第二代基因工程下列关于蛋白质工程的叙述,不正确的是 [ ] A.实施蛋白质工程的前提条件是了解蛋白质结构和功能的关系
B.基因工程是蛋白质工程的关键技术
C.蛋白质工程是对蛋白质分子的直接改造
D.蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程科学家为提高玉米中赖氨酸含量,计划将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸变成异亮氨酸,将二氢吡啶二羧酸合成酶中104位的氨基酸由天冬氨酸变成异亮氨酸,就可以使玉米叶片和种子中的游离赖氨酸含量分别提高5倍和2倍。下列对蛋白质的改造,操作正确的是 [ ] A.直接改造蛋白质的空间结构
B.直接对相应的基因进行改造
C.直接对氨基酸序列进行改造
D.直接改造相应的mRNA有关蛋白质工程的说法,不正确的 [ ] A.蛋白质工程从属于基因工程
B.蛋白质工程生产出来的一般是自然界中没有蛋白质
C.蛋白质工程是对自然界中的蛋白质分子直接修饰、改造,以满足人们的需要
D.蛋白质工程中可能构建出一种全新的基因细菌蛋白质在极端环境条件下可通过肽链之间的二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因分子量不同而以电泳方式分离。下图是一个分析细菌蛋白的电泳结果图,“-”代表没加还原剂,“+”代表加有还原剂,还原剂可打断二硫键,“M”代表已知分子量的蛋白质,右侧数字代表蛋白质或多肽的相对分子量。根据左侧结果,下列哪个图案最能代表该细菌原本的多肽结构(注意:“一”代表二硫键): [ ] A.
B.
C.
D.下图表示细胞内基因控制蛋白质合成的过程,请根据图回答下列问题: (1)图甲中方框内所示结构是______的一部分,它的合成是以______为模板,在______的催化下合成的。
(2)网乙中以d为模板合成物质e的过程称为_____,完成此过程的场所是_____,所需要的原料是______。
(3)从化学组成分析,下列生物中与图乙中结构f的化学组成最相似的是______。
A.乳酸杆菌 B.噬菌体 C.染色体 D.HIV
(4)玉米籽粒中的赖氨酸含量较低,是因为合成赖氨酸过程中的两个关键的酶一天冬氨酸激酶、二氢吡啶二羧酸合成酶的活性受赖氨酸浓度的影响。当赖氨酸浓度达到一定量时会抑制这两种酶的活性,影响细胞继续合成赖氨酸。如果将天冬氨酸激酶中的第352位的苏氨酸变为异亮氨酸,把二氢吡啶二羧酸合成酶中第104位的天冬酰氨变成异亮氨酸,可以使玉米籽粒中游离赖氨酸含量提高2倍,此改造过程即为蛋白质工程。由上述资料可知,蛋白质工程的目标足根据对蛋白质_______的特定需求,对蛋白质进行分子设计,根据中心法则便可以改造天然蛋白质。即蛋白质工程中直接操作的对象是__________,所获得的产品是_______________。蛋白质工程的基本流程正确的是
①蛋白质分子结构设计 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列[ ]
A.①→②→③→④
B.④→②→①→③
C.③→①→④→②
D.③→④→①→②科学家将β-干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达,使干扰素第17位的半胱氨酸变成丝氨酸,结果大大提高了β-干扰素的抗病活性,并且提高了储存稳定性。该生物技术为 [ ] A.基因工程
B.蛋白质工程
C.基因突变
D.细胞工程科学家为提高玉米中赖氨酸含量,计划将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸变成异亮氨酸,将二氢吡啶二羧酸合成酶中104位的氨基酸由天冬氨酸变成异亮氨酸,就可以使玉米叶片和种子中的游离赖氨酸含量分别提高5倍和2倍,下列对蛋白质的改造,操作正确的是 [ ] A.直接通过分子水平改造蛋白质
B.直接改造相应的mRNA
C.对相应的基因进行操作
D.重新合成新的基因某种微生物合成的蛋白酶与人体消化液中的蛋白酶的结构和功能很相似,只有对热稳定性较差,进入人体后容易失效。现要将此酶开发成一种片剂,临床治疗食物的消化不良,最佳方案是 [ ] A.对此酶中的少数氨基酸替换,以改善其功能
B.将此酶与人蛋白酶进行拼接,形成新的蛋白酶
C.重新设计与创造一种全新的蛋白酶
D.减少此酶在片剂中的含量基因工程与蛋白质工程的区别是 [ ] A.基因工程需对基因进行分子水平操作,蛋白质工程不对基因进行操作
B.基因工程合成的是天然存在的蛋白质,蛋白质工程合成的可以是天然不存在的蛋白质
C.基因工程是分子水平操作,蛋白质工程是细胞水平(或性状水平)操作
D.基因工程完全不同于蛋白质工程关于蛋白质工程的说法,正确的是 [ ] A.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作
B.蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在的新型蛋白质分子
C.对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的
D.蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的以下关于蛋白质工程的说法正确的是 [ ] A.蛋白质工程以基因工程为基础
B.蛋白质工程就是酶工程的延伸
C.蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造
D.蛋白质工程只能生产天然的蛋白质下面各项中与蛋白质工程没有直接关系的是 [ ] A.利用各种高科技手段分析蛋白质的分子结构
B.研究并改变某种蛋白质相关基因的碱基序列
C.设计和制造自然界中没有的人工蛋白质
D.用基因替换的方法治疗人的某种遗传病关于蛋白质工程的说法,错误的是 [ ] A.蛋白质工程能定向地改造蛋白质分子的结构,使之更加符合人类需要
B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作,定向改变分子的结构
C.蛋白质工程能产生自然界中不存在的新型蛋白质分子
D.蛋白质工程与基因工程密不可分,又称为第二代基因工程蛋白质工程的基本流程正确的是
①蛋白质分子结构设计 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列[ ] A.①→②→③→④
B.④→②→①→③
C.③→①→④→②
D.③→④→①→②香蕉原产于热带地区,是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响,对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒(BBTV,单链环状DNA病毒)引起的香蕉束顶病,对香蕉产生的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体,由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式,缺少遗传变异性,因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平,具有重要意义。请根据上述材料,回答下列问题。
(1)简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。_____________________________。
(2)脱毒香蕉苗的获得,可采用__________的方法,此方法的依据是___________和___________。
(3)建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量,请问可用哪些方法检测病毒的存在?_________________(列举两种方法)。
(4)在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值,该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。___________________(列举两点)。
(5)如何利用afp基因,通过转基因技术获得抗寒能力提高的香蕉植株?在运用转基因香蕉的过程中,在生态安全方面可能会出现什么问题?________________(列举两点)。
(6)从细胞工程的角度出发,简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及其依据。__________________。另外,抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期,请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。__________________。根据改造蛋白质的部位的多少,对蛋白质的改造可分为三类,不正确的是 [ ] A.“大改”,设计并制造出自然界不存在的全新蛋白质
B.“中改”,在蛋白质分子中替代一个肽段
C.“小改”,改造蛋白质分子中的几个氨基酸残基
D.“微改”,改造蛋白质分子中的某种原子猪的胰岛素用于人体时降血糖效果不明显,原因是猪胰岛素分子中有一氨基酸与人的不同。为了使猪胰岛素用于治疗人类糖尿病,用蛋白质工程的蛋白质分子设计的最佳方案是 [ ] A.对猪胰岛素进行一个氨基酸的替换
B.将猪胰岛素和人胰岛素进行拼接组成新的胰岛素
C.将猪和人的胰岛素混合在一起治疗糖尿病
D.根据人的胰岛素设计制造一种全新的胰岛素下列说法正确的是 [ ] A.蛋白质工程和基因工程的目的是获得人类需要的蛋白质,所以两者没有区别
B.通过蛋白质工程改造后的蛋白质有的仍是天然的蛋白质
C.蛋白质工程是在基因水平上改造蛋白质的
D.蛋白质工程是在蛋白质分子水平上改造蛋白质的当前医学上,第二代生物技术药物正逐渐取代第一代多肽蛋白质类替代治疗剂。则第一代药物与第二代***药物分别是 [ ] A.都与天然产物完全相同
B.都与天然产物不相同
C.第一代药物与天然产物相同、第二代***药物与天然产物不同
D.第一代药物与天然产物不相同、第二代***药物与天然产物相同已知有三种氨基酸的密码子是:甲硫氨酸(AUG)、色氨酸(UCG)、苯丙氨酸(UUU或UUC)。某多肽链的一段氨基酸序列是:…-甲硫氨酸-色氨酸-苯丙氨酸-色氨酸-…
(1)怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?请把相应的碱基序列写出来。________________。
(2)确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因(DNA)?________________。蛋白质工程是指根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行分子设计、生产的过程。下面是蛋白质工程的基本途径,试回答下列有关问题: (1)图中③过程的主要依据是每种氨基酸都有其对应的_______,后者位于_______分子上,其上的核苷酸序列与基因中的脱氧核苷酸之间存在着_______关系。
(2)通过③过程获得的脱氧核苷酸序列不是完整的基因,要使这一序列能够表达、发挥作用,还必须在序列上、下游加上_______和_______,在这个过程中需要_______酶的参与。
(3)完成④过程需要涉及________技术。下列各项中不属于蛋白质工程在医学上应用的是 [ ] A.基因芯片用于HIV诊断
B.t-PA用于医治心肌梗死
C.速效胰岛素用于治疗糖尿病
D.人-鼠嵌合抗体用于识别、***伤肿瘤细胞枯草杆菌产生的蛋白酶具有催化分解蛋白质的特性,但极易被氧化而失效。1985年,美国的埃斯特尔将枯草菌蛋白酶分子中的第222位氨基酸替换后,虽然其水解活性有所下降,但抗氧化能力大大提高。用这种水解酶作为洗涤剂的添加剂,可以有效地除去血渍、奶渍等蛋白质、污渍。
(1)改造枯草杆菌蛋白酶的生物技术是_______________。
(2)改造后的枯草杆菌中的控制合成蛋白酶的基因与原来相比,至少有_______个碱基对发生变化。
(3)利用生物技术改造蛋白质,提高了蛋白质的_____性,埃斯特尔所做的工作是对已知蛋白质进行____。蛋白质工程的设计程序中正确的一组是
①合成蛋白质分子结构 ②基因的脱氧核苷酸序列 ③mRNA ④蛋白质预期功能 ⑤推测氨基酸序列 ⑥蛋白质的预期结构[ ] A.⑥→②→③→④→⑤→①
B.⑤→④→③→⑥→①→②
C.④→⑥→⑤→②→③→①
D.②→③→⑤→①→⑥→④降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低,半衰期较短。某科学机构为了研究一种活性高、半衰期长的新型降钙素,从预期新型降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如下图。在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题: (1)Klenow酶是一种__________酶,合成的双链DNA有___________个碱基对。
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含***质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①.大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它____________。
②.设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是____________。
③.要进行***质粒的鉴定和选择,需要大肠杆菌质粒中含有___________。
(3)经DNA测序表明,最初获得的多个***质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是_____。
(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是___________。下列关于生物工程的叙述,正确的是 [ ] A.基因工程能产生自然界根本不存在的基因
B.蛋白质工程能产生自然界根本不存在的蛋白质
C.单克隆抗体的制备过程体现了动物细胞的全能性
D.通过对造血干细胞改造,治愈血友病患者,并确保其后代正常鸡的输卵管细胞能合成卵清蛋白、红细胞能合成β-珠蛋白、胰岛细胞能合成胰岛素。用编码上述蛋白质的基因分别做探针,对上述三种细胞中提取的总DNA用限制酶切割形成的片段进行杂交实验,另用同样的三种基因探针,对上述三种细胞中提取的总RNA进行杂交实验,上述实验结果如下表(“+”表示杂交过程中有杂合双链,“-”表示杂交过程没有杂合双链)。下列是表中①到⑥中填写内容,其中正确的是 [ ] A.+++---
B.+-+-++
C.+-+-+-
D.----++胰岛素可以用于治疗糖尿病,但是胰岛素被注射人人体后,会堆积在皮下,要经过较长时间才能进入血液,而进入血液的胰岛素又容易分解,因此治疗效果受到影响。下图是用蛋白质工程设计的速效胰岛素的生产过程,请据图回答有关问题。 (1)构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键,图中构建新的胰岛素模型的主要依据是________。
(2)图解中从新的胰岛素模型到新的胰岛素基因的基本思路是什么?_____________。
(3)新的胰岛素基因与运载体(质粒)结合过程中需要限制性内切酶和DNA连接酶。已知限制性内切酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-。请画出质粒被限制性内切酶I切割后所形成的黏性末端___________。DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求?____________。
(4)若将含有新的胰岛素基因的表达载体导入植物细胞中,最常用的有效做法是____________。
(5)若要利用大肠杆菌速效生产胰岛素,需用到的生物工程有____________、___________和发酵工程。下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题。 (1)图中cDNA文库_______________基因组文库(填“大于”“等于”或者“小于”)。
(2)①过程提取的DNA需要_____________的切割,B过程是_____________。
(3)为在短时间内大量获得目的基因,可用扩增的方法___________,其原理是___________。
(4)目的基因获取之后,需要进行__________,此步骤是基因工程的核心。运载体组成上必须有_________、__________、___________以及标记基因等。
(5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是__________,其能否在此植物体内稳定遗传的关键是____________,可以用___________技术进行检测。
(6)如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性,需要对现有蛋白质进行改造,这要通过基因工程延伸—蛋白质工程。首先要设计预期的_________,再推测应有的氨基酸序列,找到相对应的________。
(7)除植物基因工程硕果累累之外。在动物基因工程、基因工程药物和基因治疗等方面也取得了显著成果,请列举出至少两方面的应用。______________________。科学家将β-干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达,使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸,结果大大提高β-干扰素的抗病性活性,并且提高了储存稳定性,该生物技术为 [ ] A.基因工程
B.蛋白质工程
C.胚胎工程
D.细胞工程下图是某种动物蛋白质工程的示意图,请分析回答: (1)蛋白质工程与基因工程最大的不同是_______________的来源不同,图中编号_______代表人工合成。
(2)为获得较多的受精卵用于研究,⑦过程的处理方案是____________。若⑦过程所得的卵母细胞是从卵巢中获得的,则体外受精前应在体外人工培养至________________。
(3)由于***DNA分子成功导入受体细胞的频率低,所以在转化后通常需要进行________操作。下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程图,结合所学知识及相关信息回答下列问题: (1)图中cDNA文库__________基因组文库(填“大于”、“等于”或“小于”)。
(2)①过程提取的DNA需要___________的切割,B过程是__________。
(3)为在短时间内获得大量目的基因,可用__________扩增的方法,其原理是__________。
(4)目的基因获取之后,需要进行___________,其组成必须有__________以及标记基因等。此步骤是基因工程的核心。
(5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是__________,其能否在此植物体内稳定遗传的关键是____________,可以用__________技术进行检测。
(6)如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性,需要对现有蛋白质进行改造,这要通过基因工程的延伸——蛋白质工程。首先要设计预期的_________,再推测应有的氨基酸序列,找到相对应的________。
(7)除植物基因工程硕果累累之外,人们在动物基因工程、基因工程药物和基因治疗等方面也取得了显著成果,请列举出至少两方面的应用:_____________。蛋白质工程的基本流程正确的是:
①设计蛋白质分子结构 ②DNA合成 ③预期蛋白质功能 ④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列[ ]
A.①→②→③→④
B.④→②→①→③
C.③→④→①→②
D.③→①→④→②下列关于蛋白质工程的说法不正确的是 [ ] A.蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构,使之更加符合人类的需要
B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作,定向改变分子的结构
C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子
D.蛋白质工程是基因工程的延伸,又被称为第二代基因工程下列哪项不是蛋白质工程中的蛋白质分子设计 [ ] A.对已知结构的蛋白质进行少数氨基酸的替换
B.对不同来源的蛋白质分子进行拼接组装
C.从氨基酸的排列顺序开始设计全新蛋白质
D.设计控制蛋白质合成的基因中的核苷酸序列猪的胰岛素用于人体降低血糖浓度效果不明显,原因是猪胰岛素分子中有一个氨基酸与人的不同。为了使猪胰岛素临床用于人治疗糖尿病,用蛋白质工程的蛋白质分子设计的最佳方案是 [ ] A.对猪胰岛素进行一个不同氨基酸的替换
B.将猪胰岛素和人胰岛素进行拼接组成新的胰岛素
C.将猪和人的胰岛素混合在一起治疗糖尿病
D.根据人的胰岛素设计制造一种全新的胰岛素在蛋白质工程中,已知氨基酸序列如何确定mRNA的碱基序列 [ ] A.通过基因中碱基对序列确定
B.通过氨基酸的密码子确定
C.通过mRNA上U的位置确定
D.通过转运RNA上的碱基序列确定
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