题目

BJ5183细胞感受态的制备
我之前用拿来的BJ5183菌液划板挑单菌落,然后扩大培养保存菌种.最近用该菌种用氯化钙法制备感受态细胞然后用pShuttel-CMV转染（连上了目的基因）,但是Kna板子上培养了进2天的菌落非常少（疑似也就4-5个）,同时非常小（大小也就相当于一个卫星菌落）,这是什么原因?BJ5183感受态细胞的制备有什么特殊需要注意的吗?

提问时间：2021-10-20

答案

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有epp管和枪头都提前放在-80度冰箱冷冻.