题目
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
用什么方法.
用什么方法.
提问时间:2021-04-04
答案
双酶切,然后做ligase连接就好.连接的过程中会出现很多突变.
然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点(连接产物本来就不多,突变又多).如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化(效率太低了,只能用成型的质粒).
转化之后你要挑选菌落,去做测序(一般交给公司),因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.
等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.
给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切(分开的),加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化(电激转化还有clean脱盐)
挑去菌落
提取DNA 测序(((得到了你要的哦)))
选定菌落,液氮保存
然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点(连接产物本来就不多,突变又多).如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化(效率太低了,只能用成型的质粒).
转化之后你要挑选菌落,去做测序(一般交给公司),因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.
等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.
给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切(分开的),加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化(电激转化还有clean脱盐)
挑去菌落
提取DNA 测序(((得到了你要的哦)))
选定菌落,液氮保存
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
最新试题
- 1数学题 向量
- 2句子have/has ‘有’,变否定句在have/has后加not,变疑问句时将have/has提前.请问能加助动词do/does吗?
- 3separate与divide的用法区别.
- 41S等于多少ms(毫秒)1ms等于多少us(微秒)
- 5评价手册的家长评语怎么写(小学)
- 6已知正数数列an的前n项和为Sn,若an和2的等差中项与Sn和2的等比中项相等
- 7一列火车通过长221米的桥需要42秒,用同样的速度通过长172米的隧道需36秒,列车长_米,列车的速度是_米.
- 8如图所示,已知P是线段AB上一点,M为AB的中点,P在MB上,N为PB中点,(1)若AP=5cm,PB=3cm,求MN的长
- 9中翻英机器谢绝
- 10菠菜的英文怎么说?
热门考点
- 1已知集合A={x|x2-ax+a2-19=0},B={x|x2-5x+6=0},C={x|x2+2x-8=0}求a取任何实数时,A∩B≠空集,A∩C=空集同时成立!跪求学霸解答!
- 2“朝济而夕设版焉”这句话有什么典故?
- 3有什么影开头的成语吗 谐音也可以````
- 4分数乘法中 一个数乘分数,分母可以和分子约分吗?
- 5"理所当然“在句首的句子!
- 6mum,can I have some juice,please?
- 7关于形容音乐的成语
- 8What concentration ratio of acetic acid (Ka = 1.8 x 10‐5) relative to acetate is required to
- 9We are going to fly home 同义句转换
- 10已知函数f(x)=根号3sinxcosx-cosx的平方+1/2,x属于R,则f(x)的递减区间为