题目

茚三酮显色问题
本人做叶片中游离氨基酸的含量的测定,用的茚三酮法.但是将处理好的混合试剂用分光光度计比色的时候,发现数值会不断地下降,而且很厉害.这是什么原因?将试液放入试管水浴,混合试液颜色会由浅黄慢慢变成深红紫色,取出后过一段时间待试液冷却后,颜色就会慢慢变浅,这是什么原因?哪位高人能解答?
所用试剂：
水合茚三酮试剂： 取 0．6g茚三酮置于烧杯中，加 l5ml 正丙醇，令其溶解，再加30 ml 正丁醇，6 0m1 乙二醇，最后加入 9ml pH5．4 0．2M的醋酸盐缓冲液。
PH值为5.5左右的醋酸-醋酸钠缓冲液。
0.3%抗坏血酸
简单说下过程，我测的是竹叶中的游离氨基酸，取材料0.1g，加3ml 0.2M的醋酸迅速研磨，研磨后用滤纸过滤，用缓冲液定容到50毫升。开水水浴10分钟，，目的是沉淀样品中的蛋白质和氧化抗坏血酸．然后冷却 。然后在另外的试管中加入3ml茚三酮，1ml缓冲液，1ml样液，0.1ml抗坏血酸，再水浴10分钟，冷却，稀释。580nm测吸光度！吸光度读数基本是1-2秒就减少1，10分钟内能从300多掉到100多。该取哪个读数？真不清楚中间是怎么个原因。是不是氨基酸浓度太低？因为感觉我做的空白对比读数下降的更快。另外我的样液水浴后是呈红葡萄酒那样的深红紫色，这是不是就是书上所谓的蓝紫色？

提问时间：2021-04-02

答案

我觉得楼上的解答有个不妥之处：楼主说明了过程,无论是反应前试样的处理还是反应后的测定,都是冷却了的.所以,温度这方面应该不会影响测定了.而楼主担心的氨基酸浓度过低这种假设可能也不会很大,因为茚三酮的显色反应...