题目

我们机构想使用博凌科为的pSURE-T 载体连接试剂盒,据说可以简化PCR产物的克隆,用过的给我介绍下

提问时间：2021-04-02

答案

博凌科为的这款产品确实能做到这一点,我们机构就一直在用. 许多高温DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3’-末端后都带有一个突出的碱基A,这样的PCR产物可以用3’-末端后带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆.pSURE-T载体是为简化PCR产物的克隆而设计的.pSURE-T是一种新颖的pUC系列T载体,和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同,pSURE-T通过Xcm I酶切后使其多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率.其多克隆位点更多的单切点和b-半乳糖苷酶阅读框架的调整大大方便了克隆的蓝/白筛选.插入位点两端独特设计的两个PstI位点使插入片段可以用Pst I单酶切进行检测,也可以用非常廉价而高效的EcoR I和Hind III 双酶切进行检测.可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序.pSURE-T含有T7 RNA聚合酶的启动子,可以对插入片段进行体外转录.