题目

做突变时为何要用PNK酶把引物磷酸化
在做定点突变或者序列插入之类的时候为什么要将引物的5’端磷酸化呢?本人是新手希望能得到大家的帮助,
是因为如果不磷酸化的话，后面连接就连不上吗？如果把PCR产物直接转到感受态细菌的话是不是就不用连接酶了？也不用这样磷酸化了，多谢给予指导

提问时间：2021-03-25

答案

不知道你是用什么方法做的
我们一般有两种方法做点突变
而且都不用磷酸化的
一种是搭桥法
这种方法用pcr把突变的基因片段拉出来
然后连进载体
还有种方法
就是直接pcr在质粒拉一圈
这种方法用DpnI消化模板后
直接转化就好了
两种都不要磷酸化