题目

PCR反应体系50uL改25uL
欲将PCR反应体系50uL改为25uL,方法是用量各减半,请问机器上的程序还需要改吗?要多少个循环（原来是40个循环）?最后得到的产物与改前相比会有改变吗?
最后得到的产物浓度与改前相比会有改变吗?

提问时间：2021-03-21

答案

进行PCR反应试验的时候,其各种物质的含量是以终浓度来表示,即你所加入物质的量除以整个反应物总体积,只要终浓度不变,试验结果是不会变的,也就是你产物的浓度时不会变的.只不过是你的PCR产物量减半了,如果你用来进行克隆的话就要注意够不够.
还有,你说的循环数,循环数没有一个固定的标准,是根据你的试验要定.一般32—37个循环足够,因为在PCR后期循环中,随着taq酶以及各种离子的减少,不足以提供PCR的量,从而影响反应.建议你在做你这个试验的时候,可以看看文献,看看别人所用的试验体系.从而确定你的PCR反应程序.