题目
请问硫酸铵沉淀的方法是什么?
提问时间:2020-11-20
答案
硫酸铵可能会损坏某些蛋白.加入硫酸铵晶体时应小心:局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀.
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.
沉淀所需溶液:
饱和硫酸铵溶液(在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解).
1M Tris-HCl,pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液.
方法:
1,过滤(0.45μm膜)或离心样品(4°C 10000g).
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.
3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时.
4,10000g离心20min.
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液(如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液)洗涤重悬沉淀两次.再次离心.
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.
7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.
沉淀所需溶液:
饱和硫酸铵溶液(在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解).
1M Tris-HCl,pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液.
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1,过滤(0.45μm膜)或离心样品(4°C 10000g).
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.
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4,10000g离心20min.
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液(如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液)洗涤重悬沉淀两次.再次离心.
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.
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举一反三
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