题目

SDS裂解DNA时,加入TE的浓度是多少?有影响么?

提问时间：2020-10-30

答案

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法
提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行
SDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离
CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~
DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了
以下是一些具体方法,希望有用
基因组DNA提取方法
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb.在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础.主要是CTAB方法,其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法.2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法.根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等
试验步骤：
1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集.
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集.试验步骤2再重新作一边.
3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀.
4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,
5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的（酚,氯仿,异戊醇）混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相
6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次.加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min..
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中.加入等体积的异丙醇.室温10min.
2500rpm,离心10min.弃上清.
8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇.-20℃20min.
9、12000r/min,室温离心5min.弃上清.将DNA溶于适量TE中.

外周血DNA提取技术
分离外周血白细胞提取方法：
试验步骤：
1、取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min.
2、小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中.
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min.
4、2500rpm离心10min,弃上清.
5、加入10ml溶血液,摇匀,冰浴15min.
6、3000rpm离心10min,弃上清.
7、倒置离心管,去掉残液.
8、得白细胞,－80?C冻存.
试验要求：
血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h,4℃放置不超过5h,以防白细胞自溶.

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：
试验试剂：
Ligsisbuffer：
133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml,高压灭菌.
ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml,高压灭菌.
提取缓冲液（Extractionbuffer）：
10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml,高压灭菌
试验步骤：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl,充分颠混至清亮.以4000rpm,离心5min.弃上清液.
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl,充分匀浆.以6000rpm,离心5min.
3、彻底弃去上清,加入extractionbuffer500μl（裂解细胞）,混匀置于37℃,水溶1h.
4、加入8μl的蛋白酶K,颠混,37℃过夜（或55℃,3h,但是37℃效果要好些）.
5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min,以5500rpm,离心15min.
6、取上清,每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min.
7、取上清,每管加入500μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min.
8、取上清,每管加50μl的3M的NaAC＋,适量无水乙醇（预冷）至满,摇匀放入-20℃保存2h以上.
9、以12000rpm,离心20min.去上清,加入70％乙醇500μl,以12000rpm,离心5min,去上清,50－60℃干燥.
10、加入50μl灭菌去离子水,转弹,混匀.

NaI提取法提取外周血白细胞基因组：
实验步骤：
1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中,12000rpm离心12min.
2、弃上清,加双蒸水200ul溶解,摇匀20s.
3、混匀后加6MNaI溶液200ul,摇匀20s.
4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul,边加边摇,摇匀20s,12000rpm离心12min.
5、取上层液350ul,加入另一新eppendorf管中,加0.6倍体积异丙醇,摇匀20s,室温放置15min,静置后的反应体系15000rpm离心12min,使沉淀紧贴eppendorf管壁.
6、弃异丙醇,加70％乙醇1ml（不振动）,以15000rpm离心12min.
7、弃乙醇,敞开eppendorf管盖,烘干（37℃恒温箱）后,加1xTE溶液30ul,溶解DNA＞12h以上,制成的DNA液-20℃冰箱保存备用.

常用的外周血白细胞基因提取方法：
试验原理：
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂,反复抽提,使蛋白质变性,SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解,在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,核蛋白变性降解,使DNA从核蛋白中游离出来.DNA易溶于水,不溶于有机溶剂.蛋白质分子表面带有亲水基团,也容易进行水合作用,并在表面形成一层水化层,使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液.当有机溶液存在时,蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏,变性沉淀.离心后有机溶剂在试管底层(有机相),DNA存在于上层水相中,蛋白质则沉淀于两相之间.酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质.氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚.抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA,回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐,真空干燥,用TE缓冲液溶解DNA备用.
试验步骤：
1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中,加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS）,混匀,3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清.重复一次.用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀,37℃水浴温育1h.
2、将上述DNA提取液混悬白细胞,37℃水浴温育1h后,加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀,液体变粘稠.50℃水浴保温3h,裂解细胞,消化蛋白.保温过程中,应不时上下转动几次,混匀反应液.
3、反应液冷却至室温后,加入等体积的饱和酚溶液,温和地上下转动离心管5-10min,直至水相与酚相混匀成乳状液.5000rpm离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中.重复酚抽提一次.加等体积的氯仿：异戊醇（24：1）,上下转动混匀,5000rpm离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中.重复一次.
4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇,室温下慢慢摇动离心管,即有乳白色云絮状DNA出现.用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA,转入另一1.5ml离心管中,加70%乙醇0.2ml,以5000rpm离心5min.洗涤DNA,弃上清,去除残留的盐.重复一次.室温挥发残留的乙醇,但不要让DNA完全干燥.加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动,DNA完全溶解通常需12-24h.制成的DNA液-20℃冰箱保存备用.

真核细胞DNA的制备
一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的.这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验.
根据材料来源不同,采取不同的材料处理方法,而后的DNA提取方法大体类似,但都应考虑以下两个原则：
1、防止和抑制DNase对DNA的降解.
2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏.
试剂准备：
1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0).
2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl.
3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml.
4、20%SDS
5、2mg/ml蛋白酶K
6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、无水乙醇、75%乙醇
试验步骤：
材料处理：
1、新鲜或冰冻组织处理：
1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎,加TE0.5ml,转移到匀浆器中匀浆.
2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中.
3)加20%SDS25ml,蛋白酶K(2mg/ml)25ml,混匀.
4)60°C水浴1-3hr.
2、培养细胞处理：
1)将培养细胞悬浮后,用TBS洗涤一次.
2)离心4000g×5min,去除上清液.
3)加10倍体积的裂解缓冲液.
4)50-55°C水浴1-2hr.
DNA提取：
1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中,温和、充分混匀3min.
2、离心5000g×10min,取上层水相到另一1.5ml离心管中.
3、加等体积饱和酚,混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中.
4、加等体积酚/氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中.如水相仍不澄清,可重复此步骤数次.
5、加等体积氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中.
6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇,轻轻倒置混匀.
7、待絮状物出现后,离心5000g×5min,弃上清液.
8、沉淀用75%乙醇洗涤,离心5000g×3min,弃上清液.
9、室温下挥发乙醇,待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜.

植物组织中DNA的提取
试验原理：
脱氧核糖核酸（deoxribonucleicacid,DNA）是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一.从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白.如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键.DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液中,而RNA则能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中,利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开.制备过程中,细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中,使DNA因被降解而影响得率,在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA,既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离,再加入阴离子去垢剂0.15％的SDS,经过2h搅拌,或用氯仿－异醇除去蛋白,通过离心使蛋白质沉淀而除去,得到的是含有核酸的上清液.然后用95％的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来.
植物DNA的SDS提取法：
试验试剂：
1、研磨缓冲液：称取59.63gNaCl,13.25g柠檬酸三钠,37.2gEDTA－Na分别溶解后合并为一,用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0,并定容至1000ml.
2、10×SSC溶液：称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠,分别溶解,一起定容至1000ml.
3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍.
4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍.
5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液,用1mol/LHCl,pH至5.0,使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）.
6、氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合.
7、5mol/L高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O70.23g,先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml.
8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止,然后在70～80℃的水浴中溶解,趁热过滤,冷却之后即将滤液放入冰箱,待结晶出现再置室温下凉干待用.
9、1mol／LHCl.
10、0.2mol/LNaOH.
11、二苯胺乙醛试剂：1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中,添加1.5ml浓硫酸,装入棕色瓶,贮存暗处,使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕.
12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）.
13、0.05mol/LNaOH.
14、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中,再用0.05mol/LNaOH定容至25ml,后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中,加5.0ml1mol/LHClO4,混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度,则得100μg/ml的标准溶液.
实验步骤：
1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中,加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g左右的SDS,置冰浴上研磨成糊状.
2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液,加上塞子,剧烈振荡30s,转入离心管,静置片刻以脱除组织蛋白质.以4000rpm离心5min.
3、离心形成三层,小心地吸取上层清液至刻度试管中,弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿.
4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min）,以灭活组织的DNA酶,然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温,加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）〕,使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L.
5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中,振荡1min,静置后在室温下离心（4000rpm）5min,取上清液置小烧杯中.
6、用滴管吸95％的预冷乙醇,慢慢地加入烧杯中上清液的表面上,直至乙醇的体积为上清液的两倍,用玻璃棒轻轻搅动.此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上.
7、然后加入0.5ml左右的10×SSC,使最终浓度为1×SSC.
8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品.
9、加入已处理的Rnase溶液,使其最后的作用浓度为50～70μg/ml,并在37℃水浴中保温30min,以除去RNA.
10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液,在三角瓶中振荡1min,再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白,室温下以4000rpm离心5min,收集上层水溶液.
11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液.
植物DNA的CTAB提取法：
试验步骤：
1、称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末.
2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min.
3、取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300转离心20min.
4、将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇.充分混匀,2300rpm离心20min.
5、转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀.1000rpm离心10min,使DNA沉淀于管底.
6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜.
7、待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于15ml离心管中,用70%乙醇清洗30min.
8、离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干.
9、将风***DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存.

细菌DNA的提取方法
针对一些不易于提取的细菌的方法:
试验试剂：
抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)
25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl
10MLiCl
2MLiCl
DEPC-water（抑制RNA酶活性）
3MNaAc(pH5.2)
96%乙醇
70%乙醇
试验步骤：
1、抽提缓冲液65℃预热.
2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀,65℃,10min.
3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）,振荡,以12,000rpm,离心10min.
4、取上清,加氯仿/异戊醇（24：1）振荡,以12,000rpm,离心10min.
5、重复再作一次步骤4.
6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇）,－20C下沉淀.
7、以2,000rpm,离心10min.
8、弃上清,以70％乙醇条洗沉淀,也可以再用100％乙醇洗,然后溶解于100ml水中.

较为常用的细菌DNA提取方法：
实验步骤：
1、将菌株接种于液体LB培养基,37℃震荡培养过夜.
2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min.
3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h.
4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀,再加入80ulCTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min.
5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心4-5min,将上清转入一只新管中,加入0.6-0.8倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心.
6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后,离心弃乙醇．

真菌DNA提取总结的两种方法：
第一种方法：
试验步骤：
1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉.
2、加入4mL提取液,快速振荡混匀.
3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）.
4、以4℃,1000rpm,离心5min.
5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次.以4℃,10,000rpm,离心5min.
6、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min.
7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中.
8、加入1ulRNaseA（10mg/mL）,37℃下处理1h.
9、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次.以4℃,10,000rpm,离心5min.
10、取上清,加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上.
11、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用.
DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5）,0.5MNaCl,0.01MEDTA,1％SDS,3MNaAc.
第二种方法：
试验步骤：
1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉.
2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次.
3、加入1mL5MKAc,冰浴20min.
4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm,4℃离心5min）.
5、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,置约30min.
6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中.
7、加入1ulRNaseA（10mg/mL）,37℃处理1h.
8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次.以4℃,10,000rpm,离心5min.
9、取上清,1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上.
10、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用.
植物基因组提取(CATB法)
作者： 时间：2008-05-13 14:26:27 来源: 生物谷 浏览评论
一、实验目的
掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法.
二、实验原理
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用.
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来.再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质.上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液.
三、实验材料
水稻幼叶
四、主要配方
2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇 （400ul） 氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可.
五、实验步骤
1. DNA的提取
（1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热.
（2）取少量叶片（约1g）置于研钵中,用液氮磨至粉状；
（3） 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动；
（4） 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌中,磨碎液的高度约占管的三分之二；
（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,40 min后取出；
（6）冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管,剧烈振荡2~3 min,使两者混合均匀；
（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌中；
（8） 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；
（9）10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上； （10）60 sec后,直立离心管,加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；
（11）放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解；
（12）10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 µl 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min；
（13）10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后,直立离心管,干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；
（14）加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约15 h,使RNA消解；
（15）置于-20℃保存、备用.
2. DNA质量检测
琼脂糖电泳检测,原理和方法见实验二.
六、 注意事项
（1）叶片磨得越细越好.
（2）移液器的使用.
（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶,因此,除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外,第一步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解.