题目

实时荧光定量PCR技术原理是什么?

提问时间：2020-10-30

答案

聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 .在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 .无论定性还是定量分析,分析的都是 PCR 终产物.但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量.例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量.在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生.所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析.在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加.每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图.