题目

关于细菌基因组PCR的问题
向做过细菌PCR的请教：体系一般都是多少,退火温度呢
我们做过退火温度有48度、43度、56度,引物是通用引物1492R和27F,模板和引物都没问题,是不是引物和模板不匹配,10个菌种只有一两个能够扩增出来,求教!

提问时间：2020-10-29

答案

1.用oligo等软件检查引物和模板匹配度；
2.退火温度跨越太大,一般选用55到60度之间的程序足可以p出大多数条带.如果现在做不出来试试用其中较低的温度如55度试试.
3.别忘了做阳性对照,看看是不是体系或者菌模板有问题