题目

4、假如你进入实验室开始研究一个小鼠DNA结合蛋白的生物学功能:(1)、请设计实验确定其编码基因在小
4、假如你进入实验室开始研究一个小鼠DNA结合蛋白的生物学功能:
(1)、请设计实验确定其编码基因在小鼠细胞内的表达水平?
(2)、请设计实验确定该蛋白的那个结构域具有DNA结合功能?
(3)、如何确定该蛋白在小鼠体内(in vivo)的生物学功能.

提问时间：2020-10-18

答案

（1）基因的表达水平用northern blot吧,从氨基酸序列逆推cDNA做探针.
（2）构建一个载体,上面有编码不同结构域的DNA和LacZ激活子DNA,形成不同的domain和LacZ激活子的activation domain融合蛋白.然后LacZ操纵子后面加个报告基因.如果是某个domain有结合功能的话,报告基因就会表达.
（3）反向遗传学方法,用定点诱变直接突变掉相应的基因,获得携带一个突变的小鼠.然后通过杂交获得双突变的小鼠,看看它和正常的小鼠有不同.