题目

采集土壤中的厌氧微生物,要怎样做?
要采样土壤样品,目的是培养里面的厌氧微生物,要采多深?
采的时候要注意什么?怎样保存?
另外,之后想转移到液体培养基中培养,
路上十几个小时，要怎么保存，保证微生物不死掉？

提问时间：2020-06-25

答案

厌氧菌的培养方法
厌氧菌在有氧的情况下不能生长.要培养厌氧菌,必须创造一个无氧的环境.通常用培养基中加入还原剂,或用物理、化学方法去除环境中的游离氧,以降低氧化还原电势.如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基,牛心脑浸液培养基等.常用的厌氧培养方法有许多,可根据实际情况选用.
1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养,厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来.
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌.塑料袋透明而不透气,内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂.放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口.先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境.如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育.
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一.它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名.箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着.欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气（H2,CO2,N2）达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门.箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理.该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验.金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节.
4．厌氧盒：原理同厌氧袋,有成品销售.
5．生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物）,消耗氧气,同时产生二氧化碳,供细菌生长用.我没见过.
6．焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸,均匀撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面,用融化的白蜡封边,造成一个封闭空间.焦性末食子酸与碱反应后耗氧.该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养,简单.如有梭状芽孢杆菌.
7．疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法.疱肉和肉汤装入大试管,液面封凡士林,造成无氧环境.