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细胞融合与单克隆抗体

动物细胞融合

  两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。

诱导方法

  化学法(聚乙二醇),灭活的病毒,物理法(离心、振动、电激等)。

动物细胞融合的意义

  克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。

动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较

细胞工程

 

植物体细胞杂交

 

动物细胞融合

 

理论基础

 

细胞的全能性、细胞膜的流动性

细胞增殖、细胞膜的流动性

 

融合前处理

 

酶解法去除细胞壁 (纤维素酶、果胶酶)

 

注射特定抗原,免疫处理正常小鼠
诱导手段

 

物理法:离心、振动、电激 化学法:聚乙二醇(PEG)

 

物理法:离心、振动、电激 化学法:聚乙二醇 生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒)
诱导过程

 

第一步:原生质体的制备(酶解法) 第二步:原生质体融合(物、化法) 第三步:杂种细胞的筛选和培养 第四步:杂种植株的诱导与鉴定

正常小鼠免疫处理动物细胞的融合 (物、化、生法)杂交瘤细胞的筛 选与培养专一抗体检验阳性细胞培 养单克隆抗体的提纯

用途和意义

 

克服远缘杂交的不亲和障碍, 大大扩展杂交的亲本组合范围 应用:白菜——甘蓝等杂种植株

(1)制备单克隆抗体 (2)诊断、治疗、预防疾病,例如“生物导弹”治疗癌症

抗体

  一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

单克隆抗体的制备

  (1)制备产生特异性抗体的B淋巴细胞:向免疫小鼠体内注射特定的抗原,然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞

  (2)获得杂交瘤细胞

  ①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合;

  ②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞,该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

  (3)克隆化培养和抗体检测

  (4)将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖

  (5)提取单克隆抗体:从细胞培养液或小鼠的腹水中提取

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